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结核分支杆菌的微生物检查方法之抗酸染色


结核分支杆菌是一种专性需氧菌,因具有独特的细胞壁结构,使其对多种环境压力和消毒剂具有高度抵抗力。该菌主要通过空气传播,当感染者咳嗽、打喷嚏或说话时,含有细菌的飞沫被他人吸入后可能导致感染。结核分支杆菌主要侵犯肺部,如肺结核,但也可播散至其他器官,如肠结核等。临床最简单常见的微生物学检查方法就是涂片抗酸染色。

可从病人咳出的痰液直接涂片,用抗酸染色法染色,浓缩集菌,提高检出率。分枝杆菌的细胞壁含有大量脂质,一般染色法不易着色,一般常用齐-尼抗酸染色,以5%苯酚复红辅以加热方式使细菌着色,用乙醇脱色,再用亚甲蓝复染。结核分枝杆菌可抵抗盐酸酒精的脱色作用而染成红色,其他细菌及细胞染色蓝色。而分枝杆菌仍然为红色,即为抗酸阳性菌。

抗酸染色步骤:

01

涂片的制备:无菌操作


①涂片:接种环取痰液5-6环在载玻片上涂布成薄而均匀、大小约为1.5 cm 左右的痰膜。

②干燥:自然干燥或置于火焰上方慢慢烘干(勿将标本烤枯)。

③固定:标本迅速通过火焰外层来回三次。

02

将涂片进行染色:


(1)初染:用石碳酸复红溶液:3-4滴,室温染色5-10min后轻轻冲洗甩干。

(2)脱色:用酸性酒精溶液:3-4滴,停留2-3min,轻摇后用水冲洗,反复2次,脱色充分后水洗。

(3)复染:用亚甲基蓝溶液:1-2滴,染色1min后用水冲洗,吸水纸吸干、镜检。

03

油镜下观察结果:


油镜下可见红色,细长略弯曲、有分枝趋势的杆菌,散在或束状排列。则为阳性菌。



涂片抗酸染色是经典的肺结核细菌诊断方法,其操作简便、价格便宜。但抗酸染色阳性并不一定意味着患者感染结核病。因为多种微生物都可能导致抗酸染色阳性,如麻风杆菌、非结核分枝杆菌,所以医生在诊断时需要结合患者的临床症状、体征以及其他实验室检查结果进行综合判断。 


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(检验科:周雨、陈田珍)




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